siRNA套装使用说明

一、产品简介：

常规化学合成siRNA为21-25nt的双链小分子RNA。即用型siRNA已经经过纯化、退火等处理，只要用RNase-Free water(DEPC水）溶解并配成20uM液体即可直接用于转染细胞。产品剂型为冻干粉，产品剂量经过严格测算标明摩尔数。

套装内容	数量	规格	分装管数	说明
目的基因siRNA	3-4	2 0D	2	针对目的基因设计的干扰
GAPDH siRNA	1	0.5 0D	1	针对GAPDH的siRNA阳性对照
N C	1	0.5 0D	1	negative control
FAM-N C	1	0.5 0D	1	荧光标记的NC对照

二、保存方法：

产品以冻干粉的形式，常温运输，常温下保存两周内稳定。收到产品后，请于-20℃至-80℃保存。

液体剂型的siRNA贮存浓度一般为20uM，应避免反复冻融（尽量不要超过5次），建议溶解后的产品分装保存，-80℃可稳定保存半年以上。如果近期不做实验，产品需长期放置最好以冻干粉形式保存，冻干粉剂型可在-20℃至-80℃保存一年以上。开盖前请先稍稍离心，将粉末收集于管底，再用RNase-Free water配置成20uM的液体剂型（每1nmol加50ul DEPC水）。

三、使用方法：

产品使用时，siRNA最好冰上放置，使用完毕后，请于-20℃或-80℃小心保存。整个过程要求无RNA酶环境，与产品接触的枪头、EP管等都应该经过无酶处理。特别提示：荧光标记siRNA（FAM-NC)要求避光保存,避光使用。

四、套装说明：

1.靶基因siRNA：套装中我们会按照siRNA设计原则设计合成3-4对siRNA，序列评分依次从高到低排列。

2.GAPDH siRNA ：阳性对照组，在实验条件正确的情况下，转染GAPDH SiRNA的组份 GAPDH敲低效率qPCR检测应该在90%以上。

3.N C siRNA ：negative control，阴性对照组，干扰效率计算时数值计算时该组定义为1。

4.FAM-N C siRNA ：带绿色荧光基团的negative control组，检测转染效率时平行设置FAM-N C组（注意不是和其他组共转染），注意避光操作，6-12h荧光显微镜观察或流式检测siRNA的转染效率，平行设置的其他实验组的转染效率理论上与该组一致。

5.若您的套餐没有筛到一个有效的序列，请您提供您的详细实验信息和实验结果，包括：
6.细胞名称、转染试剂、转染条件（转染试剂与siRNA的配比、用量）、转染效率图、荧光定量PCR检测时间点（请标记数据对应的实验组）、实验重复次数等，我们技术人员会尽快分析您提供的信息并给出答复。

五、转染方法（以您使用的转染试剂说明书为准）

siRNA转染的转染试剂种类繁多，siRNA相对于质粒分子量较小，使用RNAi专用的转染试剂转染效率更佳，可显著提升干扰效率，如RNAimax、NamipoTM等。

NamipoTM转染试剂

使用说明

A.5000转离心收集RNAi干粉于管底，根据siRNA的nmol数将其溶解于RNase-Free water ，震荡混匀配置成20μM母液，配置方法见附表一。

B.使用前请用振荡器轻微震荡5s混匀，如有少量沉淀属于正常现象，本品呈透明或乳白色均不影响产品品质。

C.根据使用量（参考附表一)将Namipo（μl)与siRNA母液（μl) 1:1混合，移液器轻轻吹打10次以上充分混匀，室温或4℃孵育10分钟。

D.按照使用量将Namipo-SiRNA复合物加入培养基，吹打5-10次混匀。转染前后培养基无需特殊处理，不需要特别换液。

F.转染后检测，若所转染的siRNA带有荧光标记，可在转染12小时后直接观察荧光计算转染效率。若siRNA不带荧光，转染24-48小时可通过qPCR检测待测基因的表达情况，由于siRNA的干扰效率存在差异，为了方便判断转染是否成功，可设置一组GAPDH的siRNA阳性对照作为判断依据。

附表一配置20μM溶液用量表（siRNA合成后一般为干粉，根据提供的nmol数参照表格配置，过程中需要 RNase-Free环境）

摩尔量 nmol	0.5	1	2	5	10	20
溶解量（μL）	25	50	100	250	500	1000
各浓度siRNA用量表（20μM母液）
孔板	100nM	50nM	30nM	20nM	10nM	每孔中总体积
96-well	0.5μL	0.25μL	0.15μL	0.1μL	0.05μL	100μL
24-well	2.5μL	1.25μL	0.75μL	0.5μL	0.25μL	500μL
12-well	5μL	2.5μL	1.5μL	1μL	0.5μL	1000μL
6-well	10μL	5μL	3μL	2μL	1μL	2000μL

附表二转染体积参考表（可根据细胞转染难易程度上下调整0.3倍的使用量。推荐的siRNA 转染浓度为60nM，即表格中数值）

培养规格皿/板	表面积（cm2）	培养液（μL）	D N A （μg）	Namipo （μL）	R N A i （μL）	Namipo （μL）	*种板密度（个/孔）**
96 well	0.3	100μL	0.3μg	0.3μL	0.3μL	0.3μL	*0.5-4 104**
24 well	2	500μL	1.5μg	1.5μL	1.5μL	1.5μL	*0.5-2105**
12 well	4	1ml	3.0μg	3.0μL	3.0μL	3.0μL	*1-3105**
6 well	10	2ml	6.0μg	6.0μL	6.0μL	6.0μL	*2-3105**
60 mm	20	4ml	12.0μg	12.0μL	12.0μL	12.0μL	*8-10105**