一、CRISPR/Cas9基因编辑系统介绍
   CRISPR/Cas（Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats/CRISPR associated protein）由两部分构成：规律成簇的短间隔重复（CRISPR）和CRISPR相关蛋白（Cas）总称为常间回文重复序列丛集蛋白系统。其发挥作用还需要gRNA（guide RNA）和基因序列上的PAM结构指引Cas蛋白发挥核酸内切酶作用。在基因层面CRISPR位点主要由Cas基因，前导区域，CRISPR序列构成 。其转录出的crRNA可以靶向Cas蛋白实施切割作用

二、工作原理

   ①识别靶位点的CRISPR阵列：在细菌的CRISPR基因组中，存在一系列重复的短序列以及独特的间隔序列。间隔序列是从过去感染过的病毒DNA中获取并储存的片段，这些片段起到“免疫记忆”的作用，帮助细菌识别和抵抗再度入侵的相同或相似病毒。

   ②crRNA引导：当细菌面临病毒的入侵时，CRISPR序列转录产生成熟的crRNA（CRISPR RNA），这些crRNA与Cas9蛋白结合形成CRISPR-Cas9复合体。crRNA中的间隔序列引导复合体识别并配对靶病毒的相应DNA序列。

   ③靶向结合和定位：CRISPR-Cas9复合体利用crRNA与靶DNA上的互补序列进行碱基配对。通过这种精确的识别，Cas9蛋白能够被导向并定位到靶DNA的特定区域。

   ④DNA双链切割：Cas9蛋白具有两个关键的切割酶域，它们分别在靶DNA的两条链上导致双链断裂。这个双链断裂在目标位点上创建了切口，破坏了目标基因的正常功能。这一特性可以被利用于基因编辑，以插入、替换或删除特定的DNA片段，使CRISPR-Cas9成为一种强大的基因组编辑工具。

三、CRISPR-Cas9技术优势

       1.效率高：可精确编辑基因组，编辑效率高；

       2. 周期短：构建和使用极为方便，极大降低了实验难度，缩短实验周期；

       3. 广谱性：无基因、细胞及物种限制；

       4. 多重编辑能力：可实现多个靶位点同时进行基因打靶；

       5. 功能丰富：可实现敲除、插入、抑制、激活等多种目的基因.

  汉一生物可以提供基因敲除相关的服务（包括敲除质粒构建、敲除病毒包装以及单克隆敲除细胞株筛选等服务），如下：

      CRISPR/Cas9质粒

      CRISPR/Cas9慢病毒

      CRISPR/Cas9腺病毒

      CRISPR/Cas9腺相关病毒