质粒抽提

1.原理

       利用质粒与细菌染色体DNA在结构、大小上的差异，通过碱裂解法等方法分离。碱处理使细菌裂解并变性DNA，中性条件下质粒因超螺旋结构可复性，而染色体DNA难以复性，从而通过离心等步骤分离。 

2.主要步骤（以碱裂解法为例）

       ①细菌培养与收集：培养含质粒的细菌，离心收集菌体。

       ②菌体裂解：用Buffer重悬，加入NaOH/SDS溶液使细菌裂解，释放DNA。

       ③中和与沉淀：加入酸性溶液中和，染色体DNA与蛋白质等形成沉淀。

       ④纯化：通过离心、吸附柱（如硅胶柱）吸附质粒DNA，去除杂质。

       ⑤洗脱：用洗脱液（如水或TE缓冲液）得到纯化的质粒DNA。 

3.关键注意事项

       ①避免核酸酶污染（操作需戴手套，使用灭菌器材）。

       ②裂解和中和步骤需温和，防止质粒DNA断裂。

       ③提取的质粒纯度可通过电泳、紫外分光光度法检测（A260/A280比值约1.8-2.0为纯）。 

4.应用

       常用于基因克隆、重组DNA实验、基因表达分析等分子生物学研究。

我们的优势

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