腺相关病毒
重组腺相关病毒(AAV)是一种在体外或体内实验中均被广泛使用的病毒载体。AAV可以转导大量类型的哺乳动物细胞,并且在人体中表现为无致病性和低免疫原性,这些特点使其成为当前应用于基因治疗领域中其中一种最高效的基因递送载体。
病毒类型
单链AAV(Single-stranded AAV,ssAAV)和自互补AAV(Self-complementary AAV,scAAV)
多种血清型:1、 2、3、4、5、6、6.2、7、8、9、rh10、DJ、DJ/8、PHP.eB、PHP.S、AAV2-retro、AAV2-QuadYF和AAV2.7m8等.
不同血清型的AAV组织感染嗜亲性各不相同,表现出一定的器官靶向特异性。
下表列举了不同的AAV血清型及对应的组织亲和性:
表格 1启动子一览表(蓝体载体待构建)
|
研究方向 |
启动子 |
大小 |
组织 |
来源 |
靶向细胞 |
|
神经系统 |
hSyn |
448bp |
脑 |
人 |
成熟神经元 |
|
CaMKIIα |
1289bp |
脑 |
小鼠 |
锥体神经元 |
|
|
GFAP短 |
681bp |
脑 |
人 |
星形胶质细胞 |
|
|
GFAP长 |
2180bp |
脑 |
人 |
星形胶质细胞 |
|
|
GfaABC1D |
923bp |
脑 |
人 |
星形胶质细胞 |
|
|
iba1 |
1889bp |
脑 |
小鼠 |
小胶质细胞 |
|
|
VGAT |
1.3kb |
脑 |
小鼠 |
GABA能神经元 |
|
|
CRH |
1281bp |
神经 |
小鼠 |
神经元 |
|
|
ChAT |
894bp |
神经 |
人 |
胆碱能神经元 |
|
|
CX3CR1 |
1.2kb |
神经 |
人 |
小胶质细胞/巨噬细胞 |
|
|
OLIG2 |
/ |
脑 |
小鼠 |
少突胶质细胞/前体细胞 |
|
|
Aldh1L1 |
994bp |
神经 |
人 |
星形胶质细胞 |
|
|
hTh |
524bp |
脑 |
人 |
多巴胺能神经元 |
|
|
mTh |
303bp |
脑 |
小鼠 |
多巴胺能神经元 |
|
|
NSE |
1807bp |
神经 |
大鼠 |
多种神经元 |
|
|
Nes |
1566bp |
神经 |
大鼠 |
神经肝细胞/神经前体细胞 |
|
|
Cnp |
3046bp |
神经 |
小鼠 |
髓鞘寡突胶细胞/施万细胞 |
|
|
Tubala |
1121bp |
神经 |
大鼠 |
发育中的神经元 |
|
|
MIR218 |
908bp |
脊髓 |
人 |
运动神经元 |
|
|
Thy1 |
2888bp |
脑 |
人 |
神经元 |
|
|
MBP |
1951bp |
神经 |
小鼠 |
少突胶质细胞 |
|
|
Gad1 |
625bp |
神经 |
小鼠 |
GABA能神经元 |
|
|
MeCP2 |
229bp |
神经 |
小鼠 |
神经元 |
|
|
VGLUT1 |
2143bp |
神经 |
小鼠 |
谷氨酸能神经元 |
|
|
VGLUT2 |
1787bp |
神经 |
小鼠 |
谷氨酸能神经元 |
|
|
c-fos |
1673bp |
脑 |
小鼠 |
神经元 |
|
|
肌肉 |
EnSM22a |
594bp |
平滑肌 |
小鼠 |
血管平滑肌细胞 |
|
MHCK7 |
775bp |
骨骼肌/心肌 |
小鼠 |
横纹肌细胞 |
|
|
Nkx2.5 |
// |
/ |
小鼠 |
心肌细胞早期特异性启动子 |
|
|
hDesmin |
593bp |
骨骼肌/心肌 |
人 |
骨骼肌/心肌/卫星细胞 |
|
|
Myog |
1139bp |
肌肉 |
小鼠 |
成肌细胞 |
|
|
ACTA1 |
2162bp |
肌肉 |
人 |
成肌细胞 |
|
|
SMMHC |
1394bp |
肌肉 |
小鼠 |
平滑肌细胞 |
|
|
CK8e |
450bp |
骨骼肌/心肌 |
小鼠 |
横纹肌细胞 |
|
|
SPc5-12 |
345bp |
骨骼肌/心肌/平滑肌 |
小鼠 |
分化后的横纹肌细胞 |
|
|
心血管系统 |
cTnT |
717bp |
心脏 |
鸡 |
心肌细胞 |
|
CD68 |
343bp |
血管 |
人 |
单核巨噬细胞 |
|
|
CD68 |
659bp |
血管 |
小鼠 |
单核巨噬细胞 |
|
|
F4/80 |
1.2kb |
血管 |
小鼠 |
巨噬细胞 |
|
|
tie1 |
1142bp |
血管 |
小鼠 |
血管内皮细胞 |
|
|
ICAM2 |
389bp |
血管 |
人 |
血管内皮细胞 |
|
|
CD144 |
1599bp |
血管 |
小鼠 |
血管内皮细胞 |
|
|
CD31 |
851bp |
血管 |
小鼠 |
血管内皮细胞 |
|
|
αMHC |
2.8kb |
心脏 |
小鼠 |
心肌细胞 |
|
|
Hcn4 |
2780bp |
胚胎心脏 |
小鼠 |
心肌细胞 |
|
|
Pdgfrb |
2.0kb |
血管 |
小鼠 |
血管平滑肌细胞/少突胶质细胞前体细胞 |
|
|
CD206 |
2.0kb |
血管 |
小鼠 |
巨噬细胞 |
|
|
Periostin |
1394bp |
心脏/骨 |
/ |
成纤维细胞 |
|
|
肝脏 |
TBG |
410bp |
肝脏 |
人 |
肝细胞 |
|
ALB |
2.0kb |
肝脏 |
/ |
成熟肝细胞 |
|
|
ApoEHCR-hAAT |
1270bp |
肝脏 |
人 |
肝细胞 |
|
|
LP1 |
545bp |
肝脏 |
人 |
肝细胞 |
|
|
HLP |
252bp |
肝脏 |
人 |
肝细胞 |
|
|
骨组织 |
Col1α1 |
1.1kb |
骨/牙齿/肌腱 |
人 |
成骨/成纤维细胞 |
|
Col2α1 |
1033bp |
软骨组织 |
小鼠 |
软骨细胞 |
|
|
Osterix |
1361bp |
骨/牙齿/肌腱 |
小鼠 |
成骨细胞 |
|
|
Runx2 |
2514bp |
骨组织 |
小鼠 |
早期成骨细胞 |
|
|
CD11b |
1795bp |
骨髓 |
人 |
成熟髓样细胞 |
|
|
OC |
2141bp |
骨/软骨 |
人 |
成骨/骨/肥大软骨细胞 |
|
|
肺组织 |
SPC |
0.7kp |
肺 |
小鼠 |
肺泡II型上皮细胞/细支气管上皮细胞 |
|
SPC |
339bp |
肺 |
小鼠 |
肺泡II型上皮细胞/细支气管上皮细胞 |
|
|
肾脏 |
KSP |
1343bp |
肾脏 |
小鼠 |
肾小管上皮细胞 |
|
NPHS2 |
2589bp |
肾脏 |
人 |
足细胞 |
|
|
胰腺 |
Ins2 |
705bp |
胰腺 |
小鼠 |
胰腺胰岛β细胞 |
|
HIP |
1867bp |
胰腺 |
人 |
胰腺胰岛β细胞 |
|
|
Pdx1 |
2930bp |
胰腺 |
小鼠 |
胰腺祖细胞/胰腺β细胞 |
|
|
脂肪 |
AdipoQ(ADP) |
1646bp |
脂肪 |
小鼠 |
脂肪细胞 |
|
视网膜 |
RPE65 |
707bp |
视网膜 |
小鼠 |
视网膜色素上皮细胞 |
|
ProA1 |
2000bp |
视网膜 |
小鼠 |
视锥细胞 |
|
|
ProA7 |
500bp |
视网膜 |
小鼠 |
视锥细胞 |
|
|
hRHO |
839bp |
视网膜 |
人 |
视杆细胞 |
|
|
Grm6 |
403bp |
视网膜 |
小鼠 |
光双极细胞 |
|
|
Grm6短 |
700bp |
视网膜 |
小鼠 |
光双极细胞 |
|
|
Grm6长 |
2197bp |
视网膜 |
小鼠 |
光双极细胞 |
|
|
mRho |
471bp |
视网膜 |
小鼠 |
小鼠视紫红质启动子 |
|
|
hBEST1 |
623bp |
视网膜 |
人 |
视网膜色素上皮细胞 |
|
|
SNCG |
1446bp |
视网膜 |
人 |
视网膜神经节细胞 |
|
|
CRYBB1 |
464bp |
视网膜 |
鸡 |
晶状体上皮细胞 |
|
|
乳腺 |
MMTV |
1315bp |
乳腺 |
小鼠 |
乳腺上皮细胞 |
|
Wap |
2444bp |
乳腺 |
小鼠 |
乳腺肺泡上皮细胞 |
|
|
表皮组织 |
K14 |
2268bp |
表皮组织 |
人 |
角质细胞 |
|
K19 |
2026bp |
表皮组织 |
小鼠 |
角质细胞 |
|
|
mTyr |
560bp |
表皮组织 |
小鼠 |
黑色素细胞和黑色素瘤细胞 |
|
|
肿瘤 |
TERT |
455bp |
肿瘤细胞 |
人 |
人类端粒酶逆转录酶 |
|
Survivin短 |
269bp |
肿瘤细胞 |
人 |
癌细胞 |
|
|
Survivin长 |
987bp |
肿瘤细胞 |
人 |
癌细胞 |
|
|
/ |
Nanog |
1334bp |
/ |
小鼠 |
胚胎干细胞 |
表格 2 血清型组织噬性
|
血清型 |
组织亲和性 |
|
rAAV2/1 |
神经系统(高滴度顺向跨突触),肌肉,骨骼肌,心肌,平滑肌 |
|
rAAV2/2 |
视网膜、神经系统,肌肉,肝脏,血管平滑肌 |
|
rAAV2/3 |
肌肉,肝脏,肺,眼 |
|
rAAV2/4 |
神经系统,肌肉,眼,脑 |
|
rAAV2/5 |
神经系统,肺,视网膜,肝脏,滑膜关节 |
|
rAAV2/6 |
神经系统,肺,肌肉,心脏 |
|
rAAV2/7 |
肌肉,肝脏 |
|
rAAV2/8 |
神经系统,肝脏,肌肉,脂肪组织,胰腺,视网膜, |
|
rAAV2/9 |
神经系统,心肌,肺,视网膜,皮肤 |
|
rAAV-Rh10 |
肝脏,血液,心脏,体外感染细胞 |
|
rAAV-phpb |
突破血脑屏障 |
|
rAAV-retro |
神经系统(逆向非跨突触) |
|
rAAV-DJ |
视网膜,肺,肾脏,体外感染细胞 |
|
rAAV-BR1 |
脑血管内皮特异性 |
腺相关病毒包装服务详情
基因干扰腺相关病毒载体选择
|
载体名称 |
启动子 |
荧光抗性 |
|
pAAV-U6-ZsGreen1 |
U6 |
ZsGreen1 |
|
AAV-TBG-EGFP-mir30base-shRNA |
/ |
EGFP |
|
AAV9-CMV-EGFP-U6-shRNA |
U6 |
EGFP |
其它个性化服务请联系我们
基因过表达腺相关病毒载体选择
|
载体名称 |
启动子 |
荧光抗性 |
|
AAV-CMV-3FLAG |
CMV |
无荧光 |
|
AAV-CMV-3FLAG-P2A-EGFP |
CMV |
EGFP |
|
AAV9-ctnt |
CTNT |
无荧光 |
|
pAAV-ctnt-GFP |
CTNT |
GFP |
|
AAV-TBG-3flag-EGFP |
TBG |
EGFP |
其它个性化服务请联系我们
生产
我们通常使用三质粒系统包装重组AAV病毒。该系统采用一个携带目的基因的转移质粒、一个Rep-Cap表达质粒以及一个表达腺病毒基因(E2、E2A和VA)的辅助质粒共转染HEK293T包装细胞。细胞短暂孵育后,根据血清型的不同,收集上清或者细胞裂解液,PEG浓缩获取病毒颗粒。对于超纯化AAV(体内应用级别),再通过碘克沙醇对病毒颗粒进一步纯化和浓缩。

图1 三质粒法包装AAV的典型流程
对于每一批我们生产的AAV病毒,我们的质量控制包括qPCR滴度检测、微生物负荷检测(针对细菌、真菌)、支原体检测等。若转移载体同时编码一个荧光标记基因,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况。此外,对于超纯化AAV病毒,我们还可以检测内毒素水平和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度。
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规 格 |
交付标准 |
周 期 |
对照 |
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2*13vg/ml |
2-4周 |
送等量对照 |
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