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Cre/LoxP重组系统

一、产品介绍

        Cre-loxP系统是一种重组酶系统,源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,该系统由组织特异性重组酶CreloxP位点组成,其中Cre重组酶由343个氨基酸组成的38kDa蛋白,有4个亚基和2个域:较大的羧基(C)域和较小的氨基(N)域。是一种位点特异性的DNA重组酶,能特异识别loxp位点,介导loxp位点间的序列删除或重组;loxP位点是一段长度为34bpDNA序列,包括两个13bp的反向重复序列和一个不对称的8bp间隔区,其中反向重复序列是Cre重组酶的特异识别位点,而8bp的间隔区域决定了loxP位点的方向。

        Cre-loxP系统是一种被用作控制基因组DNA中位点特异性重组事件的遗传工具,被广泛应用于特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位,可达到在基因水平上对生物体进行定向遗传改造的目的。该系统在真核生物和原核生物中均有广泛应用。

 Cre重组酶和loxP位点

二、作用原理

          Cre重组酶识别loxP位点两端的反向重复序列并结合形成二聚体,然后此二聚体与另一个loxP位点上的二聚体结合形成一个四聚体。LoxP位点是有方向性的,四聚体连接的两个位点在方向上是平行的。然后两个loxP位点间的DNA序列被Cre重组酶切断。接着,DNA连接酶快速高效地将这些链连接起来。重组的结果取决于loxP位点的位置和方向。主要存在几下几种重组方式:

   删除(Deletion):当两个loxP位点在同一DNA链上并且同向排列时,Cre重组酶会删除两个loxP位点之间的DNA序列,并将剩余的DNA片段重新连接。这个过程几乎是不可逆的,也是最常用的方式。四个loxP位点分别位于两条DNA链或染色体上,Cre重组酶诱导loxP间的序列互换。

   反转(Inversion):当两个loxP位点在同一DNA链上但反向排列时,Cre重组酶会使两个loxP位点之间的DNA片段发生180度反转。这个过程是可逆的。

  易位(Translocation):两个loxP位点位于不同的DNA链或染色体上,Cre重组酶会使两个loxP位点左右两侧的DNA片段发生互换易位。易位过程是可逆的,该方式运用较少。

 

三、Cre-LoxP系统的优点

   Cre-LoxP系统优势,主要体现在:时空特异、高效性、准确性、快速性。由于Cre-loxP重组系统的高效简单的作用方式,它已成为体内外DNA重组的有力工具。

 

   应用Cre-loxP重组系统较为常见的形式是以转基因动物为载体和以病毒为载体两种形式。汉一生物为您提供Cre-loxP重组系统病毒包装服务结合组织特异性的启动子和不同的AAV血清型,可以获得更精准的组织特异性。

以下是汉一生物提供的现货cre产品:

类别

载体名称

启动子

启动子表达位置

荧光

AAV

pAAV-CAG-EGFP-T2A-Cre

Cag

广谱

EGFP

pAAV-CAMKlla-GFP-2A-Cre

CaMklla

谷氨酸能神经元

GFP

pAAV-CMV bGlobin-Cre-eGFP

CMV-bGlobin

广谱

EGFP

pAAV-hSyn-Cre-EGFP

hSyn

神经元

EGFP

pAAV-pmSyn1-EBFP-Cre

pmSyn1

神经元

EGFP

pAAV-Syn-Cre

Syn

神经元

慢病毒

EF1a-3FLAG-MCS-IRES-puromycin

EF1a

广谱

EF1a-3FLAG-MCS-IRES-EGFP

EF1a

广谱

EGFP

腺病毒

CMV-MCS-3FLAG

CMV

广谱

CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP

CMV

广谱

EGFP

 

 

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