MSCV逆转录病毒
MSCV（Murine stem cell virus）逆转录病毒载体是⼀种有效的转基因⼯具，能在胚胎⼲细胞、胚胎癌细胞、造⾎⼲细胞和其他⼏种哺乳动物细胞系中稳定表达外源基因。MSCV逆转录病毒载体的5’ LTR经过精⼼设计，采⽤来⾃于⿏⼲细胞PCMV病毒的序列，能激活外源基因在多能⼲细胞中的表达，从⽽克服了MMLV逆转录病毒在⼲细胞中基因沉默的问题。我们开发出⼀系列专有技术和试剂，从病毒滴度、纯度、活性以及⼀致性等⽅⾯显著提升了MSCV逆转录病毒包装⼯艺⽔平。
病毒类型
我们提供以VSV-G假病毒化的MSCV逆转录病毒包装服务。
生产/质控
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步骤 |
描述 |
时间 |
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Co-transfection |
我们常规使用的MSCV逆转录病毒包装系统包括1个转移质粒（Transfer plasmid）、1个膜蛋白表达质粒（Envelope plasmid）、1个包装质粒（Packaging plasmid），将这些质粒共转染包装细胞。包装质粒分别为Gag/Pol表达质粒。 |
第1天 |
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Supernatant collection |
在细胞里，转移质粒转录出携带目的基因（Gene of Interest，简称GOI）的MSCV RNA基因组，与包装质粒表达出的衣壳结构蛋白、酶、调控蛋白组装成病毒颗粒后，转运到细胞膜内侧，形成包膜病毒分泌到胞外。膜蛋白质粒表达的VSV-G膜蛋白锚定在细胞膜上，随着病毒成熟，与细胞膜一起成为了病毒的膜。细胞短暂孵育后，收集上清，离心去除细胞碎片并过滤。 |
第3天 |
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Concentration and purification |
PEG浓缩病毒颗粒。对于超纯化MSCV逆转录病毒（体内应用级别），采用蔗糖离心方法进一步纯化、浓缩病毒。 |
第4天 |
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Quality Control |
对病毒进行滴度测定（Titer determination）、微生物检测（Bioburden test，针对细菌、真菌）、支原体检测（Mycoplasma test）等。 若转移载体同时编码一个荧光蛋白，我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况（Transduction test）。此外，对于超纯化MMLV逆转录病毒，我们还可以检测内毒素水平（Endotoxin test）。 |
第5天及以后 |
滴度保证
我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域（从5’ LTR的R元件的第一个碱基到3’ LTR的R元件的最后一个碱基）小于MSCV逆转录病毒承载限度（8.3 kb）的载体。超过该范围，载体也许会被包装进病毒，但会造成病毒滴度降低。此外，对于如下载体，我们同样不能保证滴度：
包含对包装过程有不利影响的序列，例如毒性基因（如促凋亡基因）；破坏包装细胞或病毒的完整性（如导致细胞聚集的膜蛋白、含有polyA信号序列）的基因；易于重排或者产生二级结构的序列（如重复序列或者高GC含量序列）。
用户提供的载体，因为我们无法控制载体质量。
