AAV尾静脉注射方法

       AAV病毒活体注射，根据不同组织选择不同注射方式，主要有全身给药与局部给药。今天先介绍最常用的注射方式-尾静脉注射。该注射方式主要适用于：心脏，血管，肝脏或者全身循环系统研究。其优点：操作较简单，病毒在体内扩散范围广，缺点：特异性不强，需要的病毒量较大。

1、将小鼠放在固定器中，使尾部充分暴露；

可以自制一个小圆筒，筒的直径正好容下一只小鼠，筒的一端是盲端，筒身上开N个通气孔，有一个后盖，后盖上留有一圆孔，正好容下尾巴。由于小鼠有钻洞的习性，把它往筒口一放，自己就钻进去了，然后把尾巴从盖孔中穿过，盖上后盖即可。 找一张桌子，把尾巴压在桌边沿上，由于边沿是个直角，把尾巴的下 1/3 处压在直角上能使尾部暴露很好。

2、扩张尾静脉血管；

小鼠尾静脉用热水泡一下或是用 75％的酒精擦拭小鼠尾静脉， 以使注射前使尾静脉充分充血扩张；或是在上方悬挂一灯泡，在适当 距离烤尾静脉也可以使尾静脉充血扩张。

3、将小鼠尾巴拉直，使尾巴两侧的静脉清晰可见；

4、将针头尽可能远的插入尾部侧面静脉（尽量选择一个远端部位，如果第一次注射失败，可以选择另一个更近端的注射部位）；

注：小鼠尾静脉共三根，一根背侧，另两根分置于两侧，腹侧是动脉。注射静脉位于尾巴的侧面，且侧静脉非常浅，无需进针很深；小鼠尾部背面的静脉很难常规注射；尾部腹面的血管是动脉，不可注射。

5、缓慢匀速地注射100μL 病毒悬液

参考收到病毒的滴度计算取病毒原液体积，总病毒量5*10^11vg（体积可能10-50μL)，加pbs稀释到100μL体积，建议注射体积200μL以下，剂量过多，会发生充血性心衰。若尾静脉颜色变白表明注射成功，约4s后颜色恢复正常（可在注射前检查是否回血，如有回血证明进针成功）。在注射时要缓慢，均匀推射，速度不可以快，速度快，小鼠会发生充血性心衰；如果出现这种情况，立即停止注射，对小鼠实行心脏按摩，也许可以救活；关于注射针：建议选用胰岛素注射针有大小容量可按需选择：大鼠  四号针头  300ul ；小鼠  四号针头 100ul。

6、小心将针头取出（建议静置10秒后缓慢取出），用纱布轻轻按压10s进行止血；

7、将小鼠从固定器中取出，放回笼子饲养。21天后病毒表达高峰后可取材冰冻切片观察荧光和后续检测等。
 

图1、尾静脉注射
（Gessler D J et al. Methods Mol Biol. 2019 ）

病毒包装：慢病毒，腺病毒，AAV腺相关病毒

核酸合成服务：全基因合成，siRNA合成，ASO合成，miRNA合成

载体构建服务：过表达构建，基因突变构建，sgRNA构建，shRNA构建

质粒现货：cDNA克隆库，过表达质粒库，shRNA质粒库，sgRNA文库

实验服务：质粒抽提，UTR/启动子荧光素酶验证，细胞株筛选，qpcr与WB表达检测，蛋白纯化, 蛋白互作