AAV腺相关病毒感染肺部

气管插管法

感染肺部常用注射方法有：鼻内滴注、气管插管注射和气管内注射等，本文将介绍：气管插管术。气管插管术能够将病毒载体直接灌输入肺中，却没有外科手术的风险，并且避免了上呼吸道的病毒颗粒的损失。与鼻内滴注法相比，气管插管法需要一些特殊设备，操作起来也稍有难度。

操作步骤：

1，小鼠经鼻吸入2.5%异氟醚和O2（1L/min）麻醉；

注意：动物必须处于足够深的麻醉状态以防止运动或对载体的反应而打喷嚏或咳嗽；

2，将小鼠放手术板上，固定前腿，将门牙环或橡皮筋固定小鼠上颌切牙，使小鼠仰卧，腹部面向自己；

3，把小鼠舌头拉出，并用拇指和食指按住，中指放在小鼠颈部和塑料支架之间。用食指、拇指在小鼠舌上牵引令其嘴张开，使插管路径伸直，并用中指在颈后调整头部角度；

4，将光纤柔性照明器放置距胸骨腹侧1cm处，利用光纤作为光源和引导者，推动它通过可视声带区分好食管腔与气管腔（如果看不到声带，用中指作支撑，轻轻用力拉舌）。光纤插入后，同时将导管向前推进约5mm，导管插入气管与气管分叉前的位置，然后勿移动导管，取出光纤；

5，使小鼠平躺，用胶带将导管固定在小鼠嘴部防止其移动，另一端用橡皮泥支撑；

6，用注射器通过导管输入100μL AAV（5*10^13vg病毒量稀释到100μL体积）； 注意：在抽取100μL病毒之前，吸取约100μL的空气至移液管尖，以防止病毒的丢失，并促进病毒深入肺部；

7，等待5min，使AAV充分进入下呼吸道；

8，把导管移出，将小鼠轻轻从工作台拿下，并将头部和胸部用折叠的纸巾小幅度垫高，以保证小鼠顺畅的呼吸。将小鼠放回笼中直至完全清醒。

小鼠肺部给药常用三种方式，其中鼻内滴注操作简单，创伤小，但无法感染肺叶远端，气管插管注射和气管内注射可感染肺叶远端，但操作难度大，小伙伴可根据实验目的选择合适的注射方法。AAV5对肺部的亲和性较高，AAV6和AAV9也是常用于肺部感染的血清型。启动子可以参考肺上皮细胞或者血管等相应选择，更多关于肺部感染的问题欢迎咨询汉一生物！